Unterschied zwischen PCR und Echtzeit-PCR

PCR vs. Echtzeit-PCR

PCR oder Polymerase-Kettenreaktion ist eine revolutionierte Entdeckung in der modernen Molekularbiologie, die 1983 vom Chemiker Kary Mullis entwickelt wurde. Sie ermöglicht die Amplifikation einer einzelnen Sequenz in einer komplexen DNA zur Analyse. Die Grundidee der PCR ist, dass zwei Primer, die komplementär zu den entgegengesetzten Strängen einer DNA-Sequenz sind, aufeinander ausgerichtet sind; Die Primer produzieren komplementäre Stränge, die jeweils den anderen Primer enthalten. Das Ergebnis ist also eine große Menge einer Sequenz, die der DNA entspricht, die zwischen den beiden Primern liegt. DNA-Polymerase-Enzym wird verwendet, um die Primer in der PCR zu verlängern. DNA-Polymerase ist ein thermostabiles Enzym und kann bei hohen Temperaturen (94 bis 95 ° C), die zur Denaturierung von Template-DNA verwendet werden, überleben.

Die PCR umfasst drei Schritte, nämlich wiederholte Denaturierungsrunden, Anlagerung von Primern und Synthese von DNA. Diese Reaktion wird mit einer Thermocycler-Maschine durchgeführt, damit die Temperatur schnell und genau geändert werden kann. Anwendungen der PCR sind strafrechtliche Ermittlungen, DNA-Fingerprint, Erregernachweis und DNA-Analyse früher menschlicher Spezies.

Was ist konventionelle PCR??

Es gibt drei Hauptstufen der herkömmlichen PCR, nämlich: DNA-Amplifikationsphase, Trennung der PCR und Nachweis von Produkten. Die Trennung von DNA-Segmenten erfolgt typischerweise durch Agarosegelelektrophorese. Die Produkte werden dann mit Etheiduimbromid angefärbt. Schließlich wird die Detektion durch Visualisierung von Bändern auf Gelen unter UV-Licht erreicht. Daher werden die Endergebnisse der herkömmlichen PCR nicht als Zahlen ausgedrückt. Normalerweise kann die herkömmliche PCR nur einen einzelnen Parameter erkennen.

Was ist Echtzeit-PCR??

Echtzeit-PCR kann die Amplifikation von Produkten nachweisen, wenn die Produkte synthetisiert werden. Mit der Entwicklung der Technologie hat sich die PCR zu einer sehr beliebten Technik entwickelt, insbesondere zum Nachweis und zur Identifizierung von Bakterien in Lebensmitteln. Die Echtzeit-PCR verwendet ein fluoreszierendes Farbstoffsystem und einen Thermocycler, der mit Fluoreszenzdetektionsfunktion ausgestattet ist.

Was ist der Unterschied zwischen konventioneller PCR und Echtzeit-PCR??

• Konventionelle PCR ist zeitaufwändiger, da sie die amplifizierten PCR-Produkte mittels Gelelektrophorese analysiert. Im Gegensatz dazu ist Echtzeit-PCR weniger zeitaufwändig, da sie Amplifikationen während der frühen Reaktionsphasen nachweisen kann.

• Echtzeit-PCR sammelt Daten in der exponentiellen Wachstumsphase der PCR, während herkömmliche PCR-Daten am Endpunkt der Reaktion sammeln.

• Die Endpunktergebnisse der herkömmlichen PCR sind möglicherweise nicht sehr genau, aber die Ergebnisse der Echtzeit-PCR sind sehr genau.

• Echtzeit-PCR ist empfindlicher als herkömmliche PCR.

• Die herkömmliche PCR hat eine sehr geringe Auflösung, während die Echtzeit-PCR aufgrund der hohen Auflösung nur sehr geringe Änderungen feststellen kann.

• Die Endpunkterkennung herkömmlicher PCR hat einen kurzen dynamischen Bereich, während die Echtzeit-PCR-Erkennung einen großen dynamischen Bereich aufweist.

• Im Gegensatz zur herkömmlichen PCR werden automatisierte Detektionstechniken bei der Echtzeit-PCR verwendet.

• Konventionelle PCR ist hochentwickelt und arbeitsintensiv, mehr als Echtzeit-PCR.

• Im Gegensatz zur Echtzeit-PCR kann herkömmliche PCR nicht zwischen toten und lebenden Bakterien unterscheiden.

• Bei der Echtzeit-PCR werden die Produkte mithilfe eines Fluoreszenzfarbstoffsystems erkannt, während bei der konventionellen PCR Banden im Agarosegel-Medium mit Ethidiumbromid und UV-Licht sichtbar gemacht werden.