Unterschied zwischen warmer und kalter Trypsinisierung

Hauptunterschied - Warm vs Kalt Trypsinisierung
 

Warme und kalte Trypsinisierung sind zwei Methoden, die bei der enzymatischen Zerlegung von Zellen bei der Tierzellkultur verwendet werden. Das Hauptunterschied Die Trypsinisierung zwischen warmem und kaltem Wasser hängt, wie die Namen vermuten lassen, von der Temperatur ab, bei der das Trypsin für die Zelldisaggregation zugesetzt wird. Warme Trypsinisierung findet unter höheren Temperaturbedingungen statt (36,5 - 37) ⁰C) während die kalte Trypsinisierung bei niedrigen Temperaturen stattfindet.

Während des Prozesses der primären Zellkultivierung von Tierzellen werden drei Hauptmethoden verwendet, die sich als erfolgreich erwiesen haben. Die drei Methoden umfassen die mechanische Zerlegung von Zellen, die enzymatische Zerlegung von Zellen und die primäre Explantationstechnik. Die enzymatische Desaggregation von Zellen führt zur Isolierung von Zellen, und dies geschieht durch das Protein abbauende Enzym Trypsin. Daher ist dieser Prozess als Trypsinisierung bekannt. Die Trypsinisierung kann unter zwei verschiedenen Bedingungen durchgeführt werden, nämlich der warmen Trypsinisierung und der kalten Trypsinisierung. Warme Trypsinisierung ist die Methode zur Behandlung der Zellen mit Trypsin unter warmen Bedingungen bei einer Temperatur von 36,5 - 37 ⁰C. Kalte Trypsinisierung ist der Prozess der Trypsinbehandlung, der unter kälteren Bedingungen vorzugsweise in Eis stattfindet, wobei sehr niedrige Temperaturen erhalten werden.

INHALT

1. Übersicht und Schlüsseldifferenz
2. Was ist warme Trypsinierung?
3. Was ist kalte Trypsinierung?
4. Ähnlichkeiten zwischen warmer und kalter Trypsinisierung
5. Side-by-Side-Vergleich - Warm gegen kalte Trypsinisierung in tabellarischer Form
6. Zusammenfassung

Was ist warme Trypsinierung??

Trypsinisierung kann durchgeführt werden, um die zellulären Komponenten aufzulösen, um die Zellen zu isolieren, um eine primäre Zellkultur zu erzeugen. Trypsin ist ein Proteinabbauenzym, und das bei der Trypsinierung verwendete Enzymgemisch kann entweder ein Rohextrakt oder ein gereinigtes Produkt sein. Es wird gesagt, dass der Rohextrakt bei der Proteinlyse und dem Zellaufschluss effizienter ist, da er andere Abbauenzyme enthält.

Die warme Trypsinisierung ist die am häufigsten eingesetzte enzymatische Methode zur Zelldisaggregation, die unter höheren Temperaturbedingungen stattfindet. Vor der Behandlung durch Trypsinierung wird das gewünschte Gewebe in kleinere Stücke geschnitten. Dies erleichtert den einfachen Disaggregationsprozess. Das geschnittene Gewebe wird dann in einem speziellen Medium, dem sogenannten Dissection Basal Salt Medium, gewaschen.

Nach Beendigung des Waschschritts werden die Zellen in einen Kolben umgewandelt, der das aktive Enzym enthält, das Trypsin ist. Da diese Technik ein warmes Trypsinierungsprotokoll impliziert, wird das Trypsin bei einer Temperatur von etwa 37 ° C angeordnet ⁰C etwa vier Stunden lang.

Abbildung 01: Trypsin

Der Inhalt wird unter Verwendung von Zentrifugationsmethoden gemischt und bewegt, um das Protokoll zu erleichtern und den Auflösungsprozess zu beschleunigen. Sobald die empfohlene Zeit erreicht ist, können die Zellen vom Überstand abgeleitet werden. Die vom Überstand abgeleiteten Zellen werden dann bei einer bestimmten Temperatur und Zeit inkubiert.

Was ist kalte Trypsinierung??

Die kalte Trypsinisierung ist die andere Art der Trypsinisierung, die unter kalten Bedingungen stattfindet. Bei dieser Technik werden die Zellen, die gehackt und gewaschen werden, in Eisfläschchen gelegt und dann mit Trypsin getränkt. Die Einweichzeit ist viel länger - etwa 6 bis 24 Stunden.

Nach Beendigung des Einweichvorgangs wird das Trypsin aus dem Zelllysat entfernt und die Gewebestücke bei 37 ° C weiter inkubiert ⁰C für ca. 20 - 30 Minuten. Die Desaggregation der Zellen wird durch wiederholtes Pipettieren der Gewebemischung bewirkt. Dadurch können sich die Zellen von der Membran lösen und zum Überstand kommen. Sobald sich die Zellen im Überstand befinden, werden sie bei einer gewünschten Temperatur und Zeitspanne inkubiert und gezüchtet.

Das kalte Trypsinisierungsverfahren hat mehrere Vorteile

• Höhere Ausbeute an lebensfähigen Zellen, da der Zellschaden minimiert wird. Der Zellschaden wird minimiert, indem keine Zentrifugationsschritte verwendet werden.
• Sehr bequeme Methode.
• Weniger mühsam.

Die hauptsächliche Einschränkung der kalten Trypsinisierungsmethode besteht darin, dass große Mengen nicht in einem Fall verwendet werden können.

Was sind die Ähnlichkeiten zwischen warmer und kalter Trypsinisierung??

• Sowohl das Warm- als auch das Kalt-Trypsinisierungsverfahren verwenden das Enzym Trypsin zur Zerlegung von Zellen.
• In Zellkulturverfahren zur Disaggregation von Zellen werden sowohl warme als auch kalte Trypsinisierungsprozesse eingesetzt.
• Sowohl bei der warmen als auch bei der kalten Trypsinisierungsbehandlung stammen die Zellen vom Überstand.

Was ist der Unterschied zwischen warmer und kalter Trypsinierung??

Warm gegen kalte Trypsinierung
Warme Trypsinisierung ist die Methode zur Behandlung der Zellen mit Trypsin unter warmen Bedingungen bei einer Temperatur von 36,5 - 37 0.	Kalte Trypsinisierung ist der Prozess der Trypsinbehandlung, der unter kälteren Bedingungen vorzugsweise in Eis stattfindet, wobei sehr niedrige Temperaturen erhalten werden.
Protokoll
Die geschnittenen Gewebestücke werden bei 37 gehalten 0C während des gesamten Verfahrens kontinuierlich.	Die geschnittenen Gewebestücke werden zunächst bei eiskalten Temperaturen gehalten und dann bei 37 ° C gehalten 0.
Temperatur
Warme Trypsinisierung findet bei 36,5 - 37 statt 0	Kalte Trypsinisierung tritt bei eiskalten Temperaturen auf.
Zeit verbraucht
Weniger Zeitaufwand für den gesamten Prozess (ca. 4 Stunden) der warmen Trypsinisierung.	Längere Zeit (etwa 6 - 24 Stunden) für die kalte Trypsinisierung.
Ausbeute an lebensfähigen Zellen
Niedrige warme Trypsinisierung.	Hohe kalte Trypsinisierung.
Verwendung der Zentrifugation
Die Zentrifugation ist für die Disaggregation von Zellen bei der warmen Trypsinisierung erforderlich.	Bei der kalten Trypsinierung ist keine Zentrifugation erforderlich.
Anfangsgewebemenge für die Trypsinisierung
Bei der warmen Trypsinierung kann eine größere Menge an Gewebe verwendet werden.	Bei der kalten Trypsinierung kann eine geringere Menge an Gewebe verwendet werden.
Zellschaden
Hoch durch Zentrifugation bei der warmen Trypsinisierung.	Weniger durch kalte Trypsinisierung.

Zusammenfassung - Warm vs Kalt Trypsinisierung

Trypsinisierung ist die Methode der Verwendung des Protein-abbauenden Enzyms Trypsin zur Disaggregation und Herstellung von primären Zellkulturen während des Zellkultivierungsprozesses. Es gibt zwei Hauptverfahren der Trypsinisierung, die auf den während des Verfahrens angewandten Temperaturen basieren. Sie sind warme und kalte Trypsinisierung. Die warme Trypsinisierung wird bei 37 durchgeführt ⁰C, während die kalte Trypsinisierung unter eiskalten Bedingungen durchgeführt wird. Obwohl die kalte Trypsinisierung eine längere Zeit in Anspruch nimmt, wird behauptet, sie habe eine höhere Ausbeute an lebensfähigen Zellen. Dies liegt daran, dass die Zellschädigung bei der kalten Trypsinisierung minimiert wird, da keine kräftigen Zentrifugationsschritte verwendet werden. Dies ist der Unterschied zwischen warmer und kalter Trypsinisierung.

Referenz:

1. "Trypsinisierung". Trypsinisierung - eine Übersicht | ScienceDirect-Themen. Hier verfügbar 
2. „Primäre Zellkultur: 3 Techniken (mit Diagramm).“ Biologiediskussion, 16. Oktober 2015. Hier verfügbar  

Bildhöflichkeit:

1. "Trypsin active site" Von Fdardel - Eigene Arbeit, (CC BY-SA 3.0) über Commons Wikimedia