Unterschied zwischen Vorwärts- und Rückwärtsgrundierung

Schlüsseldifferenz - Vorwärts vs Reverse Primer
 

Die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) ist eine DNA-Amplifikationsmethode, die in molekularbiologischen Anwendungen eingesetzt wird. Es ist eine häufig verwendete Technik, die Millionen von Milliarden Kopien einer besonders interessierten DNA-Sequenz anfertigt. Es ist ein in vitro in Laboratorien durchgeführte Methode. Die PCR-Technik hängt vollständig von der kommerziell hergestellten DNA-Polymerase ab, die als Taq-Polymerase bezeichnet wird. Außerdem sind mehrere andere Komponenten und eine ordnungsgemäße Temperaturhaltung erforderlich. Eine wichtige Komponente sind Primer. Primer sind die kurzen DNA-Sequenzen, die speziell für die Ziel-DNA-Sequenz entworfen wurden. Sie sind normalerweise ungefähr 20 Nukleotide lang. Taq-Polymerase katalysiert die Zugabe von Nukleotiden zu einer bereits vorhandenen Nukleotidsequenz. Daher dienen Primer als Ausgangspunkt für die Synthese neuer Stränge. Taq-Polymerase funktioniert nur in 5 'bis 3'-Richtung, daher erfolgt die DNA-Synthese in derselben 5'-3'-Richtung. Da DNA doppelsträngig ist, werden zwei Arten von Primern für die PCR benötigt. Sie sind als Forward Primer und Reverse Primer bekannt. Vorwärts- und Rückwärtsprimer werden basierend auf der Richtung der Verlängerung des Primers in der DNA bezeichnet, wenn die DNA-Synthese stattfindet. Der Forward-Primer bindet mit dem Antisense-DNA-Strang und initiiert die Synthese des + ve-Strangs des Gens in 5'-3'-Richtung. Der Reverse-Primer bindet mit dem Sense-Strang an und initiiert die Synthese des komplementären Strangs des kodierenden Strangs. das ist -ve der Strang des Gens in 5 'nach 3' Richtung. Dies ist das Hauptunterschied zwischen Vorwärts- und Rückwärtsprimer.

INHALT

1. Übersicht und Schlüsseldifferenz
2. Was ist ein Forward Primer?
3. Was ist ein Reverse Primer?
4. Ähnlichkeiten zwischen Vorwärts- und Rückwärtsgrundierung
5. Side-by-Side-Vergleich - Vorwärts- und Rückwärts-Primer in Tabellenform
6. Zusammenfassung

Was ist ein Forward Primer??

Vorwärtsorientierung ist die Synthese des kodierenden Strangs oder des Sinnstrangs eines Gens. Taq-Polymerase katalysiert die Synthese eines neuen Strangs in 5'-Richtung. Die Synthese des kodierenden Strangs tritt auf, wenn der Primer mit dem nicht kodierenden oder dem Antisense-Strang anlagert und sich in 5'-3'-Richtung verlängert.

Abbildung 01: Vorwärts- und Rückwärtsprimer

Der Primer, der mit dem Antisense-Strang oder dem nicht-codierenden Strang oder dem Template-Strang anlagert, ist als Forward-Primer bekannt, da der Forward-Primer als Ausgangspunkt für die Synthese der Codierung oder des positiven Strangs des Gens fungiert. Der Vorwärtsprimer weist eine kurze Nukleotidsequenz auf, die zum 3'-Flankenende des Antisense-Strangs komplementär ist. Es hybridisiert mit dem Antisense-Strang und erleichtert der Taq-Polymerase das Hinzufügen von Nucleotiden, die komplementär zum Template-Strang sind.

Was ist ein Reverse Primer??

Der Reverse-Primer ist die kurze DNA-Sequenz, die mit dem 3'-Ende des Sense-Strangs oder des kodierenden Strangs anlagert. Der Reverse-Primer dient als Ausgangspunkt für die Synthese eines komplementären Strangs der kodierenden Sequenz oder der nicht kodierenden Sequenz. Reverse Primer ist komplementär zum 3'-Ende des kodierenden Strangs ausgelegt. Daher glüht es mit dem flankierenden 3'-Ende des kodierenden Strangs und ermöglicht es Taq-Polymerase, den Antisense-Strang oder den Templatstrang zu synthetisieren. Da seine Orientierung umgekehrt ist, wird dieser Primer als Reverse-Primer markiert.

Sowohl Reverse- als auch Forward-Primer sind wichtig für die Produktion von Millionen bis Milliarden Kopien bestimmter DNA-Regionen, die gezielt oder interessiert sind.

Was sind die Ähnlichkeiten zwischen Vorwärts- und Rückwärtsprimer?

• Sowohl Forward als auch Reverse Primer werden aus Oligonukleotiden hergestellt.
• Sowohl der Vorwärts- als auch der Rückwärts-Primer besitzen eine kurze Nukleotidsequenz, die zu den flankierenden Enden der DNA-Doppelstränge komplementär ist.
• Sowohl der Forward- als auch der Reverse-Primer bestehen normalerweise aus 20 Nukleotiden.
• Sowohl Forward- als auch Reverse-Primer werden in Polymerase-Kettenreaktionen verwendet.
• Sowohl Forward als auch Reverse Primer werden kommerziell synthetisiert.
• Sowohl Forward als auch Reverse Primer sind temperaturstabil und haben normalerweise ähnliche Tm.
• Sowohl Vorwärts- als auch Rückwärtsprimer werden mit den Ziel-DNA-Sequenzen anneliert.
• Sowohl Forward als auch Reverse Primer werden entsprechend den PCR-Reaktionen entwickelt.
• Sowohl Forward als auch Reverse Primer dienen als Ausgangspunkt für die DNA-Amplifikation.
• Sowohl Reverse- als auch Forward-Primer sind wichtig für die Produktion von Millionen Kopien bestimmter Regionen zielgerichteter oder interessierter DNA-Sequenzen.

Was ist der Unterschied zwischen Vorwärts- und Rückwärtsprimer?

Vorwärtsprimer vs Rückwärtsprimer
Vorwärtsprimer ist die kurze DNA-Sequenz, die mit dem 3'-Ende des nichtkodierenden oder des Template-Strangs des Gens hybridisiert und als Ausgangspunkt für die Synthese der kodierenden Sequenz dient.	Reverse Primer ist die kurze DNA-Sequenz, die mit dem 3'-Ende des kodierenden oder Nicht-Template-Strangs hybridisiert und als Ausgangspunkt für die Synthese der nicht kodierenden Sequenz dient.
Glühen Strang
Vorwärtsprimer annelt mit Schablonenstrang.	Der Reverse-Primer wird mit dem Nicht-Schablonenstrang geglüht.
Resultierende neue Sequenz
Vorwärtsprimer erleichtert die Synthese der kodierenden Sequenz.	Reverse Primer erleichtert die Synthese der nicht kodierenden Sequenz.

Zusammenfassung - Weiterleiten vs Reverse Primer

Bei der PCR-Technik gibt es zwei Arten von Primern. Sie sind Vorwärts- und Rückwärtsprimer. Aufgrund der Verlängerung des Primers in der neuen DNA-Strangsynthese werden diese Primer markiert oder benannt. Taq-Polymerase synthetisiert die neue DNA in 5 'bis 3'-Orientierung. Daher sind Primer komplementär zu den 3'-Enden der Doppelstränge ausgelegt. Vorwärtsprimer, der sich in 5'-3'-Richtung verlängert, hybridisiert mit dem 3'-Ende des Antisense oder der Matrize oder der nichtkodierenden Sequenz. Sie dient als Ausgangspunkt für die Synthese der Codierungssequenz. Ein umgekehrter Primer, der sich in 5'-3'-Richtung verlängert, hybridisiert mit dem 3'-Ende der Kodierung oder der Nicht-Schablone oder dem Erfassungsstrang. Sie dient als Ausgangspunkt für die Synthese der nicht kodierenden Sequenz. Dies ist der Unterschied zwischen Vorwärts- und Rückwärtsprimer.

Referenz:

1. „Primer (Molekularbiologie)“. Wikipedia, Wikimedia Foundation, 20. Februar 2018. Hier verfügbar 
2. "Polymerase-Kettenreaktion (PCR)". Khan Academy. Hier verfügbar 

Bildhöflichkeit:

1.'Primers RevComp Melted2'By Richard Wheeler (Zephyris) - Eigene Arbeit, (CC BY-SA 3.0) über Commons Wikimedia