Unterschied zwischen Phusion und Taq-Polymerase

Hauptunterschied - Phusion vs Taq Polymerase
 

DNA-Polymerasen sind weit verbreitete Enzyme in molekularbiologischen Techniken und sind auch natürlicherweise in allen Organismen vorhanden, die eine DNA-Replikation durchlaufen. Sie sind die wichtigsten polymerisierenden Enzyme, die während der Replikation involviert sind. DNA-Polymerase ist in der Lage, Nukleotide an das freie 3'-Ende des DNA-Strangs anzulagern, wodurch die Verlängerung eines neuen Strangs bewirkt wird. Aufgrund der Entwicklungen der Molekularbiologie in der Krankheitsdiagnostik und in industriellen Anwendungen ist es gegenwärtig wichtig, Polymerasen mit verschiedenen vorteilhaften Eigenschaften herzustellen. Dies erhöht die Genauigkeit der Methode und macht sie zu einer schnelleren Technik. Phusion und Taq-Polymerase sind zwei kommerziell hergestellte thermostabile Polymerase-Enzyme, die in speziellen molekularen Anwendungen eingesetzt werden. Phusion ist eine DNA-Polymerase, die aus isoliert wurde Pyrococcus furiosus und wird hauptsächlich in Klonierungsexperimenten verwendet, um die Genauigkeit zu erhöhen. Taq-DNA-Polymerase ist die Standard-DNA-Polymerase, die in der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) verwendet wird, und sie wird aus dem thermostabilen Bakterium isoliert. Thermus aquaticus. Das Hauptunterschied zwischen den beiden Enzymen ist die Quelle Mikroorganismus. Die Phusion wird vom Extremophilen isoliert, Pyrococcus furiosus während Taq-Polymerase aus dem Thermophil isoliert wird, Thermus aquaticus.

INHALT

1. Übersicht und Schlüsseldifferenz
2. Was ist Phusion?
3. Was ist Taq-Polymerase?
4. Ähnlichkeiten zwischen Phusion und Taq-Polymerase
5. Side-by-Side-Vergleich - Phusion vs. Taq-Polymerase in tabellarischer Form
6. Zusammenfassung

Was ist Phusion??

Phusions-DNA-Polymerase ist eine neuartige Polymerase, die durch Isolieren des Enzyms hergestellt wird Pyrococcus furiosus, das ist eine extremophile Archaea. Diese Mikroben befinden sich unter extrem hohen Temperaturbedingungen, wodurch die Polymerase zu einer sehr hitzestabilen Polymerase wird. Phusionspolymerase wird verwendet, um eine extreme Genauigkeit gegenüber der herkömmlichen thermostabilen Polymerase zu erreichen; Taq-Polymerase. Phusionspolymerase ist in der Lage, lange Matrizen mit bis zu 7,5 kb genomischer DNA zu amplifizieren. Die optimale Polymerisationskapazität der Phusionspolymerase liegt bei 72⁰ C. Phusion wird auch in Klonierungsprodukten zur Sequenzierung, Expressionsanalyse und Mutationsanalyse verwendet.

Phusions-DNA-Polymerase hat die 3 '- 5'-Exonuklease-Aktivität. Dies ermöglicht das Korrekturlesen des neu synthetisierten Strangs nach der Synthese. Daher können die Nukleotid-Fehlpaarungen leicht repariert werden. Somit hat es eine geringere Fehlerquote. Allgemeine Vorteile der Phusionspolymerase sind;

• Extreme Treue
• Hohe Geschwindigkeit und reduzierte Erweiterungszeit
• Robuste Reaktionen und erfordern minimale Optimierung
• Hohe Ausbeute

Abbildung 01: Phusion

Der Hauptnachteil der Phusionspolymerase besteht darin, dass sie in Gegenwart von Desoxyuridintriphosphat (dUTP) gehemmt wird. Wenn sich DUTPs in der Reaktionsmischung ansammeln, kann dies die Wirkung der Phusionspolymerase hemmen. Dies wird verhindert, indem das Reaktionsgemisch vor der Zugabe des Enzyms mit dUTPase behandelt wird. Gegenwärtig wird anstelle der Phusionspolymerase eine dUTP-resistente Variante der Phusionspolymerase, bekannt als Pfu Turbo, als Abhilfe für dieses Problem verwendet.

Was ist Taq-Polymerase??

Taq-DNA-Polymerase Die Erfindung hat das Gebiet der Molekularbiologie revolutioniert. Es löste ein Hauptproblem bei der DNA-Amplifikation. Taq-DNA-Polymerase ist ein hitzestabiles Polymeraseenzym, das aus dem thermophilen Bakterium extrahiert und isoliert wird, Thermus aquaticus. Die Entdeckung dieser Enzyme führt zur Entwicklung der PCR. Dieses Enzym hat die Verwendung einer Polymerasekettenreaktion bei der DNA-Amplifikation anstelle herkömmlicher aufwendiger Klonierungsverfahren erlaubt. PCR wird heute in der molekularen Diagnostik, in der Landwirtschaft und in der Industrie eingesetzt, wobei viele neue Varianten der Technik hinzukommen.

Abbildung 02: Taq-Polymerase

Taq-DNA-Polymerase funktioniert im optimalen Temperaturbereich zwischen 72⁰C-80⁰C. Taq-DNA-Polymerase erfordert einen Cofaktor; Magnesium für seine Funktion. Taq-Polymerase verfügt nicht über die 3 '- 5'-Korrekturlesefähigkeit. Daher ist die Fehlerrate der Taq-DNA-Polymerase im Vergleich zu neueren Typen von DNA-Polymerasen wie Phusionspolymerase usw. hoch. Die Beliebtheit der Taq-DNA-Polymerase bleibt jedoch bestehen In der gesamten Welt der Wissenschaft ist dies aufgrund der Bequemlichkeit und Flexibilität des Enzyms gleich.

Was sind die Ähnlichkeiten zwischen Phusion und Taq-Polymerase??

• Sowohl Phusions- als auch Taq-Polymerase-Enzyme polymerisieren Enzyme, die in der Lage sind, Nukleotide an das freie 3'-Ende des DNA-Strangs anzulagern.
• Sowohl Phusions- als auch Taq-Polymerasen erfordern eine Primersequenz, um die Polymerisation zu initiieren.
• Sowohl Phusions- als auch Taq-Polymerasen sind hitzestabil.
• Sowohl Phusions- als auch Taq-Polymerasen werden in PCR-Mechanismen verwendet, um DNA zu amplifizieren.
• Wenn die Polymerase zu dem Reaktionsgemisch gegeben wird, werden als letztes sowohl Phus- als auch Taq-Polymerasen zugegeben, um die Effizienz des Enzyms sicherzustellen.
• Sowohl Phusions- als auch Taq-Polymerasen werden kommerziell für experimentelle Zwecke der Molekularbiologie synthetisiert.
• Sowohl Phusions- als auch Taq-Polymerasen erfordern einen Cofaktor, um seine Funktion zu erfüllen.

Was ist der Unterschied zwischen Phusion und Taq-Polymerase??

Phusion vs. Taq-Polymerase
Phusion ist eine DNA-Polymerase, die aus isoliert wurde Pyrococcus furiosus und wird hauptsächlich in Klonierungsexperimenten verwendet, um die Genauigkeit zu erhöhen.	Taq-DNA-Polymerase ist die Standard-DNA-Polymerase, die in der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) verwendet wird und aus dem thermostabilen Bakterium isoliert wird, Thermus aquaticus.
Quellorganismus
Die Phusion wird aus extremophilen Archaeen gewonnen - Pyrococcus furiosus.	Diese literarischen Werke erstrecken sich von der Kolonialzeit bis zur Entkolonialisierung.
Korrekturlesen
3 '- 5' Korrekturlesefunktion ist in Phusion vorhanden.	Die Taq-Polymerase besitzt keine 3 '- 5'-Korrekturlesefähigkeit.
Treue
High Fidelity gibt es bei Phusion.	Taq-Polymerase zeigt eine geringe Genauigkeit.
Verstärkung
Durch Phusion können lange DNA-Fragmente amplifiziert werden.	Taq-Polymerase ist in der Lage, viel kürzere DNA-Fragmente zu amplifizieren.
dUTP-Vergiftung
Die Phusionswirkung wird durch die ungerade Ansammlung gehemmt.	Taq-Polymerase wird durch dUPT nicht inhibiert.

Zusammenfassung - Phusion vs Taq Polymerase

Phusion und Taq-DNA-Polymerase sind zwei hitzebeständige Polymerasen, die in PCR-Techniken verwendet werden. Die Phusion ist eine aus dem Extremophil isolierte Polymerase, Pyrococcus furiosus Taq wird dagegen aus den thermostabilen Bakterien isoliert Thermus aquaticus. Die Entdeckung der Taq-DNA-Polymerase führt zur PCR-Erfindung. Phusion hat gegenüber Taq viele Vorteile, die Phusion zu einer besseren Option bei der Herstellung von DNA mit hoher Genauigkeit gemacht haben. Taq-Polymerase wird jedoch immer noch als Standardpolymerase-Enzym in der PCR verwendet. Dies ist der Unterschied zwischen Phusion und Taq-Polymerase.

Referenz:

1. Biolabs, New England. "Taq DNA Polymerases". New England Biolabs: Reagenzien für die Life-Sciences-Industrie. Hier verfügbar  
2. "Phusions-DNA-Polymerase". New England Biolabs. Hier verfügbar 

Bildhöflichkeit:

1.'GAM illustriert von Nivin Nasri'By NivinN - Eigene Arbeit, (CC BY-SA 4.0) über Commons Wikimedia  
2.'Taq'By Adenosin - Eigene Arbeit, (CC BY-SA 3.0) über Commons Wikimedia