Unterschied zwischen der SDS-Seite und der Native-Seite

Schlüsseldifferenz - SDS-Seite vs. Seite
 

SDS und native page sind zwei Arten von Polyacrylamid-Gelelektrophoresetechniken, die in der Molekularbiologie verwendet werden. Das Hauptunterschied zwischen SDS-Seite und Native-Page ist der Typ des verwendeten Polyacrylamidgels. In SDS Page wird ein denaturierendes Gel verwendet, daher werden Moleküle nach ihrem Molekulargewicht getrennt. Im Gegensatz dazu werden in Native Page nicht denaturierende Gele verwendet. Daher werden Moleküle aufgrund ihrer Größe, Ladung und Form getrennt.

Die Polyacrylamid-Gelelektrophorese (Page) verwendet ein Gel, das durch Polymerisieren von Acrylamidmonomeren mit Methylenbisacrylamid hergestellt wird. Das Polyacrylamid ist zäher und hitzestabiler als Agarose. Die Polyacrylamidgele haben eine kleinere Porengröße, die eine effiziente Trennung von Proteinen ermöglicht. Es gibt zwei Haupttypen von Seiteneinstellungen, nämlich SDS-Seite und native Seite. SDS-Seite oder Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese trennt Proteine ​​nach ihrem Molekulargewicht. Denaturierende Gele werden in der SDB-Seite verwendet. Native Page verwendet nicht denaturierende Gele und trennt Proteine ​​nach Größe, Ladung und Form (3D-Konformation)..

INHALT

1. Übersicht und Schlüsseldifferenz
2. Was ist SDS-Seite?
3. Was ist native Seite
4. Ähnlichkeiten zwischen SDS-Seite und Native-Seite
5. Side-by-Side-Vergleich - SDS-Seite und native Seite in Tabellenform
6. Zusammenfassung

Was ist SDS-Seite??

Die SDS-Seite ist die am häufigsten verwendete elektrophoretische Technik, um Proteine ​​nach ihrem Molekulargewicht zu trennen. Das Gel wird durch Zugabe von SDS (Natriumdodecylsulfat), einem Detergens, hergestellt. SDS prothetiert Proteine ​​in Monomere. SDS ist ein anionisches Reinigungsmittel. Daher fügt es den Proteinen innerhalb eines weiten pH-Bereichs eine negative Nettoladung hinzu. Wenn die Netto-Negativladung auf die Proteinmoleküle aufgrund der Ladungsänderung übertragen wird, werden die komplexen Strukturen abgebaut. Aufgrund der negativen Ladung ziehen Proteine ​​zum positiven Ende. Moleküle mit niedrigerem Molekulargewicht wandern daher schneller auf der Gelmatrix und können in der Nähe der Anode beobachtet werden, während die Proteine ​​mit höherem Molekulargewicht näher an den Vertiefungen beobachtet werden.

Abbildung 01: SDB-Seite

Die SDS-Bindung an die Polypeptidkette ist proportional zu ihrer relativen Molekülmasse. Daher kann die Molekülmasse auch über die SDS-Seite bestimmt werden. Die Färbung der SDS Page-Gele erfolgt durch Bromphenolblau-Färbung. Anwendungen von SDS-Seiten reichen in einem größeren Umfang, wo sie zur Abschätzung der relativen Molekülmasse und zur Bestimmung der relativen Häufigkeit von Proteinen in einer Proteingemischung verwendet werden können. Die SDS-Seite kann auch zur Bestimmung der Proteinverteilung in einer Proteinmischung verwendet werden. Die SDS-Seite wird auch zur Reinigung und Bewertung von Proteinen verwendet. Es wird als vorläufiges Verfahren für Western Blotting und Hybridisierung verwendet, das wiederum für die Proteinkartierung und -identifizierung verwendet wird.

Was ist native Seite?

Die native Polyacrylamid-Gelelektrophorese (Native Page) verwendet ein nicht denaturierendes Gel. Daher wird der Gelmatrix kein SDS oder irgendein anderes Denaturierungsmittel zugesetzt. In Native Page basiert die Trennung von Proteinen auf der Ladung und der Größe des Proteins. Daher hängt die Mobilität des Proteins von der Ladung und der Größe des Proteins ab.

Die Ladung des Proteins hängt von den Seitenketten der Aminosäuren ab. Wenn die Seitenketten negativ geladen sind, erhält das Protein eine negative Gesamtladung und umgekehrt. Proteine ​​behalten aufgrund der stattfindenden Faltung eine 3D-Konformation bei. Die Faltung ergibt sich aus den verschiedenen Bindungstypen in Proteinen wie Disulfidbindungen, hydrophoben Wechselwirkungen und Wasserstoffbrückenbindungen. Wenn also die native Page bei einem neutralen pH-Wert gehalten wird, werden die Proteine ​​entsprechend der Molekülform des Proteins getrennt. Daher kann Native Page als empfindliche Technik zum Nachweis der Ladungs- oder Konformationsänderung des Proteins verwendet werden.

Der Hauptvorteil von native Page ist, dass das für die Seitenanalyse verwendete Protein nach der Seitenanalyse in seinem ursprünglichen Zustand wiedergewonnen werden kann, da das Protein während des Prozesses nicht gestört wird. Native Page ist eine relativ hohe Durchsatzmethode und die Stabilität des Proteins wird erhöht.

Abbildung 02: Native Page

Nach Beendigung des Gellaufs kann das Native Page-Gel durch Färben mit Bromphenolblau oder einem anderen geeigneten Färbungsreagens betrachtet werden. Die Anwendungen von Native Page umfassen die Trennung saurer Proteine ​​einschließlich Glycoproteine ​​wie rekombinantes Erythropoietin oder die Identifizierung von Proteinen, die in Rinderserumalbumin (BSA) vorhanden sind..

Was sind die Ähnlichkeiten zwischen der SDS-Seite und der Native-Seite?

• Sowohl SDS Page als auch Native Page verwenden ein Polyacrylamid-Gel als Matrix für das Gel.
• Beide werden zur Trennung und Identifizierung von Proteinen verwendet.
• Beide nutzen die elektrophoretische Mobilität, um die Verbindungen zu trennen.
• Beide können vertikal oder horizontal ausgeführt werden (meistens als vertikale Seiteneinstellungen, da die Lauflänge größer ist)..
• Die Elektrophoresevorrichtung, die den Geltank enthält, kämmt, die Stromversorgung ist für den Betrieb beider Techniken erforderlich.
• Die Visualisierung des Gels kann in beiden Techniken durch Färbemethoden erfolgen.

Was ist der Unterschied zwischen der SDS-Seite und der Native-Seite?

SDS-Seite vs. Native-Seite
SDS-Seite oder Natrium-Dodecylsulfat-Seite trennt Proteine ​​nach ihrem Molekulargewicht und verwendet ein denaturierendes Gel.	Native Page verwendet nicht denaturierende Gele und trennt Proteine ​​nach Größe, Ladung und Form (3D-Konformation)..
Art des Gels
Ein Denaturierungsgel wird in der SDS-Seite verwendet.	Auf der nativen Seite wird ein nicht denaturierendes Gel verwendet.
Anwesenheit von SDS
SDS liegt als Reinigungsmittel vor, um die Probe auf der SDS-Seite mit einer negativen Ladung zu versehen.	SDS ist auf der nativen Seite nicht vorhanden.
Trennungsgrundlage
Die Trennung von Proteinen hängt vom Molekulargewicht des Proteins in der SDS-Seite ab.	Die Trennung hängt von der Größe und Form des Proteinmoleküls auf der nativen Seite ab.
Stabilität des Proteins
Die Stabilität des Proteins ist auf der SDB-Seite gering.	Die Proteinstabilität ist auf der nativen Seite hoch.
Rückgewinnung des ursprünglichen Proteins
Nicht möglich, da es auf der SDB-Seite denaturiert wird.	Möglich auf der nativen Seite.

Zusammenfassung - SDS-Seite vs Native Seite

SDS-Seite und native Seite sind zwei Arten von Polyacrylamid-Gelelektrophoresetechniken, die zur Trennung von Proteinen verwendet werden. Die SDS-Seite wird mit einem Reinigungsmittel namens SDS behandelt. SDS verleiht dem Protein eine insgesamt negative Ladung, die dann zur Denaturierung des Proteins führt. Daher werden die Proteine ​​nach ihrem Molekulargewicht getrennt. Im Gegensatz dazu verwendet die Native Page-Technik kein Denaturierungsmittel. Daher werden die Proteine ​​entweder nach ihrer Größe oder ihrer Form getrennt. Dies ist der Unterschied zwischen der SDS-Seite und der nativen Seite.

Referenz:

1. „Prinzip und Methode der Polyacrylamidgelelektrophorese (SDS-PAGE)“. Prinzip und Methode der Polyacrylamidgelelektrophorese (SDS-PAGE) | MBL Life Sience - ASIEN-. Hier verfügbar
2. „Native Gels“. Alliance Protein Laboratories | Biophysikalische Charakterisierungsdienste. Hier verfügbar  

Bildhöflichkeit:

1.'SDS-PAGE Electrophoresis'By Bensaccount in der Wikipedia auf Englisch, (CC BY 3.0) über Commons Wikimedia  
2. "Lade eine Probe in eine Polyacrylamid-Gelelektrophorese-Well" By Blaz Nemec aus Ljubljana, Slowenien (CC BY-SA 2.0) über Commons Wikimedia