Unterschied zwischen SDS-Seite und Western Blot

Hauptunterschied - SDS-Seite vs. Western Blot
 

Western Blotting ist eine Technik, mit der ein spezifisches Protein aus einer Proteinprobe nachgewiesen wird. Diese Technik wird über mehrere Schlüsselschritte durchgeführt: Gelelektrophorese, Blotting und Hybridisierung. Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-Seite) ist eine Art Gelelektrophoresetechnik, mit der Proteine ​​nach ihrer Größe (Molekulargewicht) getrennt werden. Western Blot ist ein spezielles Blatt einer Blotmembran, mit der dasselbe Muster der Proteine ​​in der SDS-Seite übertragen wird. Der Hauptunterschied zwischen SDS Page und Western Blot ist das Die SDS-Seite ermöglicht die Trennung von Proteinen in einer Mischung während Der Western Blot ermöglicht den Nachweis und die Quantifizierung eines spezifischen Proteins aus einer Mischung. Beide sind in Proteinanalyse-Studien nützlich.

INHALT
1. Übersicht und Schlüsseldifferenz
2. Was ist SDS-Seite?
3. Was ist Western Blot?
4. Side-by-Side-Vergleich - SDS-Seite vs. Western Blot
5. Zusammenfassung

Was ist SDS-Seite??

Die SDS-Seite ist eine Gelelektrophoresetechnik, die zur Proteintrennung verwendet wird. Es wird häufig in der Biochemie, Genetik, Forensik und Molekularbiologie eingesetzt. Sobald die Proteine ​​aus der Probe extrahiert wurden, werden sie auf einem Gel aus SDS und Polyacrylamid laufen gelassen. SDS ist ein anionisches Detergens, das verwendet wird, um Proteine ​​(Denaturierungsproteine) zu linearisieren und linearisierten Proteinen eine negative Ladung zu verleihen, die ihrer Molekülmasse proportional ist. Polyacrylamid wird zum festen Träger für das Gel. Negativ geladene denaturierte Proteine ​​wandern durch das Gel zum positiven Ende der Vorrichtung. Je nach Größe der Proteine ​​unterscheiden sich die Migrationsgeschwindigkeiten zwischen den Proteinen, und es erfolgt eine Trennung. Daher ist die SDS-Seite für die Trennung einzelner Proteine ​​nach ihrer Größe nützlich.

Die Herstellung des Polyacrylamidgels für die Fraktionierung von Proteinen ist ein entscheidender Schritt in der SDS-Seite. Die richtige Konzentration des Polyacrylamids und die Art des verwendeten Vernetzungsmittels beeinflussen die physikalischen Eigenschaften des Gels stark, wodurch die eigentliche Trennung der verschiedenen Proteine ​​erfolgt. Die Porengrößen des Gels sollten für eine effektive Trennung richtig verwaltet werden. Die SDS-Seite gilt jedoch als hochauflösende Proteintrennungstechnik.

Die SDS-Seitentechnik hat eine große Einschränkung bei der Proteinanalyse. Da SDS Proteine ​​vor der Auftrennung denaturiert, ist es nicht möglich, enzymatische Aktivität, Proteinbindungswechselwirkungen, Proteincofaktoren usw. nachzuweisen.

Abbildung 01: SDB-Seite

Was ist Western Blot??

Die Western-Blotting-Technik ermöglicht den Nachweis eines spezifischen Proteins aus einem Proteingemisch und die Messung der Menge und des Molekulargewichts des Proteins. Western Blot ist die Membran, die während des Blotting-Verfahrens verwendet wird, um ein Spiegelbild der Proteinmuster im SDS-Polyacrylamid-Gel zu erhalten. Die Membran, die für das Western Blotting verwendet wird, besteht hauptsächlich aus Nitrocellulose oder Polyvinylidendifluorid (PVDF). Die Membran mit dem übertragenen Protein kann verwendet werden, um das gewünschte Protein zu identifizieren. Es erfordert qualitativ hochwertige Antikörper zum Nachweis des gewünschten Proteins durch Hybridisierung. Der Antikörper bindet an sein spezifisches Antigen und zeigt die Anwesenheit des gewünschten Antigens, das ein Protein ist.

Die Übertragung der Proteine ​​vom SDS-Polyacrylamidgel in den Western Blot erfolgt durch Elektroblotting. Es ist eine effektive und schnelle Methode, bei der die Proteine ​​aus dem Gel elektrophoreseen und auf die Nitrocellulosemembran gelangen (Western Blot)..

Abbildung 02: Western Blot

Was ist der Unterschied zwischen SDS Page und Western Blot??

SDS-Seite vs. Western Blot
Die SDS-Seite ist eine Gelelektrophoresetechnik.	Western Blot ist eine Technik, die an einer Membran durchgeführt wird, um ein spezifisches Protein aus einer Mischung zu ermitteln.
Benutzen
Die SDS-Seite ermöglicht die Trennung von Proteinen nach ihrer Größe.	Western Blot ermöglicht die Übertragung von Proteinen auf das SDS-Seitengel, ohne das Muster zu ändern, und ermöglicht die Hybridisierung mit spezifischen Antikörpern.
Nachteile
Die Denaturierung von Proteinen, hohe Kosten und das Vorhandensein von Neurotoxinchemikalien sind die Nachteile dieser Technik.	Diese Technik ist zeitaufwändig und erfordert gut erfahrene persönliche und spezifische kontrollierte Bedingungen.

Zusammenfassung - SDS-Seite vs Western Blot

SDS-Seite und Western Blot sind zwei Methoden, die an der Proteinanalyse beteiligt sind. Die SDS-Seite ermöglicht die einfache Trennung von Proteinen auf einem Gel nach ihrem Molekulargewicht. Western Blot hilft durch Hybridisierung mit spezifischen Antikörpern das Vorhandensein und die Menge eines spezifischen Proteins zu bestätigen. Dies ist der Unterschied zwischen SDS Page und Western Blot.

Verweise:
1. Blancher, C. und A. Jones. "SDS-PAGE und Western Blotting Techniques." Methoden in der molekularen Medizin. US National Library of Medicine, n. D. Netz. 27. März 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig und David H. Petering. "Native SDS-PAGE: Hochauflösende elektrophoretische Trennung von Proteinen unter Beibehaltung der nativen Eigenschaften einschließlich gebundener Metallionen." Metallomics: Integrierte Biometallforschung. US National Library of Medicine, Mai 2014. Web. 27. März 2017.

Bildhöflichkeit:
1. "SDS-PAGE Electrophoresis" Von Bensaccount in der Wikipedia auf Englisch (CC BY 3.0) über Commons Wikimedia
2. "Western Blot 114A" von Amanthabagdon - Eigene Arbeit (Public Domain) via Commons Wikimedia