Unterschied zwischen direktem und indirektem ELISA

Hauptunterschied zwischen direktem und indirektem ELISA
 

Ein enzymgebundener Immunoassay (ELISA), auch Enzymimmunoassay genannt, ist ein serologischer Test, bei dem Antikörper im Blut nachgewiesen werden. Es dient als Diagnosewerkzeug, um herauszufinden, ob der Patient einem bestimmten Virustyp oder einem anderen Infektionserreger (Antigen) ausgesetzt war und ob der Körper Antikörper gegen die Infektion gebildet hat. ELISA kann auch vergangene und aktuelle Infektionen identifizieren. Daher wird ELISA von Ärzten häufig als Voruntersuchungstest vor einer eingehenden Analyse von Krankheiten verwendet. Dieser Test kann im Labor durchgeführt werden, indem dem Patienten eine Blutprobe entnommen wird. Es gibt zwei Arten von ELISA-Tests: direkter ELISA und indirekter ELISA. Der Hauptunterschied zwischen direktem und indirektem ELISA ist der Indirekter ELISA ist empfindlicher und erfordert die Zugabe eines sekundären Antikörpers während direkter ELISA ist weniger empfindlich und verwendet nur einen primären Antikörper.

INHALT
1. Übersicht und Schlüsseldifferenz
2. Was ist direkter ELISA?
3. Was ist der indirekte ELISA?
4. Side-by-Side-Vergleich - Direkter Vergleich mit indirektem ELISA
5. Zusammenfassung

Was ist direkter ELISA??

ELISA ist ein krankheitsdiagnostischer Test, der durchgeführt wird, um das Vorhandensein bestimmter Antigene oder Antikörper im Blut festzustellen. Es wird als Plattentest durchgeführt. Es verwendet Antikörper, die mit einfach zu untersuchenden Enzymen verknüpft sind. Die Anwesenheit von Antigenen in der Serumprobe bindet an spezifische Antikörper, die mit Enzymen verbunden sind. Im letzten Schritt wird ein spezifisches Substrat hinzugefügt, um mit dem Enzym zu reagieren. Das Enzym wandelt das Substrat in ein gefärbtes oder signalerzeugendes Produkt um. Die Farbänderung im chemischen Substrat zeigt das Vorhandensein eines bestimmten Antikörpers in der Serumprobe. Beim direkten ELISA-Test wird nur ein primärer Antikörper verwendet, der an das Enzym gebunden ist. Bei der Bindung an das Antigen ändert sich schnell die Farbe, was auf das Vorhandensein des Infektionserregers im Blut hindeutet. Die Intensität der Signale ist jedoch im direkten ELISA schwächer, da die Epitope auf die Bindung der Antigene beschränkt sind. Daher ist der direkte ELISA im Vergleich zum indirekten ELISA weniger empfindlich.

Abbildung 01: Direkter ELISA-Test

Was ist der indirekte ELISA??

ELISA kann unter Verwendung zweier Arten von Antikörpern durchgeführt werden, nämlich; primärer Antikörper und sekundärer Antikörper. Das indirekte ELISA-Tool verwendet beide Antikörpertypen, um die Signale für einen besseren Nachweis zu verstärken. Die indirekte ELISA-Technik wird wie folgt durchgeführt.

1. Die Platten werden mit Antigenen inkubiert und gewaschen, um die nichtspezifische Bindung zu blockieren.
2. Dann werden primäre Antikörper zugegeben und gewaschen.
3. Enzymgebundener sekundärer Antikörper wird zugegeben und gewaschen.
4. Ein Substrat wird zugegeben und mit Enzymen reagieren gelassen.
5. Signale werden detektiert und die Anwesenheit oder Abwesenheit des spezifischen Antigens in der Probe wird identifiziert.

Im indirekten ELISA-Test können mehrere sekundäre Antikörper an einen einzelnen primären Antikörper binden. Sekundäre Antikörper sind mit leicht zu untersuchenden Enzymen verknüpft. Daher kann eine Bindung aufgrund von mehr als einer Interaktion ein starkes Signal abgeben. Daher ist der indirekte ELISA empfindlicher als der direkte ELISA. Indirekter ELISA kann jedoch aufgrund von Kreuzreaktionen der sekundären Antikörper unspezifische Signale abgeben.

Abbildung 02: Indirekter ELISA-Test

Was ist der Unterschied zwischen direktem und indirektem ELISA??

Direkte vs. Indirekte ELISA
Direkter ELISA ist im Vergleich zu indirektem ELISA weniger empfindlich.	Der indirekte ELISA ist empfindlicher.
Zeit genommen
Der direkte ELISA-Test ist ein schneller Prozess.	Der indirekte ELISA ist zeitaufwändig.
Verwendung von Antikörpern
Im direkten ELISA wird nur eine Art von Antikörpern (Primärantikörper) verwendet.	Primärer und sekundärer Antikörper werden für indirekten ELISA verwendet.
Verbindung mit Enzymen
Primärantikörper sind mit Enzymen verknüpft.	Sekundäre Antikörper sind mit Enzymen verknüpft.
Kreuzreaktivität zweiter Antikörper
Direkter ELISA eliminiert die Kreuzreaktivität von zweiten Antikörpern.	Indirekter ELISA wird durch Kreuzreaktivität der zweiten Antikörper beeinflusst.
Signale
Die Signale sind im Vergleich zu indirektem ELISA schwach.	Die Signale werden im indirekten ELISA verstärkt. Daher ist es leicht zu erkennen.

Zusammenfassung - Direkte vs. Indirekte ELISA

ELISA ist eine biochemische Technik, die hauptsächlich in der Immunologie zum Nachweis der Anwesenheit eines Antikörpers oder eines Antigens in einer Blutprobe eines Patienten verwendet wird. Es kann über zwei Prozesse durchgeführt werden, die als direkter oder indirekter ELISA bezeichnet werden. Der direkte ELISA-Test verwendet nur primäre Antikörper zum Nachweis des Antigens, während der indirekte ELISA sowohl primäre als auch sekundäre Antikörper verwendet. Im direkten ELISA werden primäre Antikörper markiert, während im indirekten ELISA sekundäre Antikörper markiert werden. Dies ist der Unterschied zwischen direktem und indirektem ELISA.

Verweise
1. "Der enzymgebundene Immunosorbent-Assay (ELISA)". Bulletin der Weltgesundheitsorganisation. US National Library of Medicine, 1976. Web. 29. März 2017
2. Loon, A. M. van, J. T. Van der Logt, F.W. Heessen und J. Van Der Veen. "Enzymgebundener Immunosorbent-Assay, bei dem markiertes Antigen zum Nachweis von Immunglobulin-M- und A-Antikörpern bei Toxoplasmose verwendet wird: Vergleich mit indirekter Immunfluoreszenz und doppeltem Sandwich-Enzym-gebundenem Immunosorbensassay." Journal of Clinical Microbiology. US National Library of Medicine, Juni 1983. Web. 29. März 2017

Bildhöflichkeit:
1. "ELISA-Diagramm" Von Cavitri - Eigene Arbeit (CC BY 3.0) über Commons Wikimedia 
2. "Indirekter ELISA" Von Cawang - Eigene Arbeit (CC0) über Commons Wikimedia